2025-2026英格蘭足總挑戰盃（FA Trophy 2025-2026）參賽球隊為英格蘭足球聯賽體系中第五至八級別的非職業聯賽球隊，賽事主要分為6個階段：資格賽(1輪)、預選賽(3輪)、正賽(5輪)、半準決賽、準決賽、決賽，除決賽外其餘比賽均採取單場決勝負的形式作賽，如雙方在90分鐘內戰平，則進行點球大戰來決出勝負。

第五級別：英格蘭足球協會聯賽24支球隊。
第六級別：英格蘭足球協會南部聯賽24支球隊、英格蘭足球協會北部聯賽24支球隊。
第七級別：英格蘭北部超级聯賽、英格蘭南部超级聯賽、英格蘭中南部超级聯賽、英格蘭依斯米安超级聯賽各22支球隊。
第八級別：北方超級聯賽東區第一級別、北方超級聯賽中部第一級別、北方超級聯賽西區第一級別、南部足球聯賽東區第一級別、南部足球聯賽西區第一級別、伊斯特米安聯賽北區第一級別、伊斯特米安聯賽中南部第一級以及伊斯特米安聯賽東南部第一級。